临床研究：生长因子修饰过的干细胞移植治疗肾病综合征
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作者:medical-388
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发布时间: 2023-12-30
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肾病综合征是由于肾小球基底膜通透性增高，导致血浆大量 蛋白从尿中丢失而引起的一种临床综合征。近年来，肾病综合征发病率呈现出快速上升趋势。长期大量蛋白尿，使机体内蛋白大量丢失，血浆蛋白低下，血浆胶体渗透压下降，进而发生水 肿及高脂血症等改变，严重者可引起肺血栓栓塞等并发症。
血管内皮生长因子(VEGF)有高度特异性。正常情况下，肾脏的VEGF主要在肾小球足细胞和远端肾小管及集合管等处有一定表达，能促进血管内皮细胞分裂，使肾小球的滤过及通透功能得以维持。
羊膜间充质干细胞有来源丰富、不受伦理学限制、低免疫原 性、多向分化能力等优势。在特定环境中，羊膜间充质干细胞能够被诱导分化为心肌细胞及神经细胞等，在心肌梗死、 脊髓损伤等疾病治疗过程中发挥了很好的作用，并且未观察到明显的排斥反应。研究发现，外源性间充质干细胞能够分化为肾小管上皮细胞而促进肾功能的恢复。
外源基因在间充质干细胞中的表达有利于增强其移植效应及提高其分化率。
探讨血管内皮生长因子基因修饰羊膜间充质干细胞移植对肾病综合征大鼠肾功能及凝血功能的改善作用。
从72只雄性SD大鼠中随机选出18只，作为正常组，未给予任何干预；余下的 54 只大鼠随机分为模型组、羊膜间充质干细胞组、血管内皮生长因子修饰组，每组 18 只，均于尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征模型。造模后24h，经尾静脉注射生理盐水、羊膜间充质干细胞悬液、血管内皮生长因子基因修饰羊膜间充质干细胞悬液各10μL，1次/d，连续3d。移植后12周采用全自动生化分析仪检测血脂水平、肾功能指标及凝血指标变化，采用三氯乙酸法测定24h尿蛋白含量，采用RT-PCR、Western blot检测大鼠肾组织 HPA及VEGFmRNA和蛋白的表达。
主要观察指标：
① 各组大鼠的血脂水平、肾功能指标及凝血指标变化；
② 羊膜间充质干细胞的存活和分布情况；
③ 大 鼠肾组织HPA及VEGF的mRNA表达；
④ 大鼠肾组织HPA及VEGF的蛋白表达。
结果与结论：
①模型组24h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平与正常组比较均明显升高(P< 0.05)，血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显降低(P< 0.01)。羊膜间充质干细胞组及血管内皮生长因子修饰组上述各指标均较模型组明显改善(P < 0.05)。血管内皮生长因子修饰组各项指标优于羊膜间充质干细胞组，差异有显著性意义(P< 0.05)；见表1
②模型组各凝血指标呈高凝趋势，与模型组比较，羊膜间充质干细胞组、血管内皮生长因子修饰组高凝状况均有改善，血管内皮生长因子修饰组更为明显；见表2
③各组肾组织HPA及VEGFmRNA的表达与模型组相比，羊膜间充质干细胞组、VEGF修饰组及正常组HPAmRNA表达量均显著减少，且正常组<vegf修饰组<羊膜间充质干细胞组，各组间vegfmrna表达量比较发现，vegf修饰组较其他3组均显著升高(p<0.05)，与模型组相比，羊膜间充质干细胞组和正常组vegf表达量亦升高(p <="" 0.05)，见图4。
④各组肾组织HPA及VEGF的蛋白表达，模型组HPA的表达量较正常组、羊膜间充质干细胞组、VEGF修饰组升高(P<0.05)；羊膜间充质干细胞组及VEGF修饰组均较模型组降低，且VEGF修饰组降低更明显(P<0.05)。各组间VEGF蛋白表达量比较发现，VEGF修饰组较其他3组均显著升高(P<0.05)，与模型组相比，羊膜间充质干细胞组和正常组蛋白表达量亦升高(P<0.05)，见图5。
研究发现，肾小球内HPA基因的活性或表达增加，将使肾小球基膜上HS的分解增加，肾小球基膜电荷屏障被破坏。与模型组相比，羊膜间充质干细胞组、 VEGF修饰组HPAmRNA表达量均显著减少，且正常组<vegf修饰组<羊膜间充质干细胞组。
上述结果表明：
应用VEGF修饰的羊膜间充质干细胞对肾病综合征大鼠进行干预能够改善肾功能及血液的高凝状态。
